Home › Manuelle tester › Utførelse

Utførelse

EVF –  HEMATOKRIT (HCT)

Prøvemateriale EDTA-blod
Prøvemengde Cirka 60 uL
Prøvebehandling Unngå langvarig stase ved prøvetaking.  
Holdbarhet     Analysen bør utføres innen 24 timer etter prøvetaking
Utstyr Hematokrit-rør (heparinisert), kitt, hematokrit-sentrifuge, avlesningstabell eller linjal.

 

  1. Merk et hematokrit-rør med initialer (tusj), og fyll det med EDTA-blod til det er igjen cirka 0,5 cm uten blod i den ene enden. Hold pekefingeren på enden av røret, tørk av røret utvendig med tupfer.
  2. Tett den enden som er uten blod med kitt. Hold hematokrit-røret horisontalt slik at blodet ikke renner ut.
  3. Plasser røret i hematokrit-sentrifugen med kittpluggen ytterst (utfra senter) og skru fast dekselet på rotoren (pass på å plassere rør diagonalt ovenfor hverandre for å balansere).
  4. Sentrifuger ved 10 000 rpm i 3 minutter hvis du bruker sentrifugen Biofuge haemo. Sentrifuger ved 12000xg (11200 rpm) i 3 minutter hvis du bruker Pico17 Thermo Scientific sentrifugen.
  5. Avlesning foregår enten ved hjelp av hematokrit-diagram eller linjal. Med linjal måles lengdene a og b, regn ut a/(a+b).

 

Videoen er utarbeidet ved Høyskolen i Bergen.

 

 

MANUELL TELLING AV Trombocytter (TPK)

Prøvemateriale EDTA-blod eller Na-citrat-blod
Prøvemengde 25uL
Prøvebehandling Unngå langvarig stase ved prøvetaking. Prøven bør stå i ro i 15 minutter etter prøvetaking.
Holdbarhet     72 timer i romtemperatur
Utstyr/reagenser Automatpipette og tipper, tupfer, 1% ammoniumoksalat-løsning, Bϋrkers tellekammer med dekkglass, kapillærrør, fuktekammer og mikroskop med fasekontrast.

       

  1. 25 μl EDTA- blod overføres med automatpipette til rør med 475 μl ammoniumoksalat. Tørk av blod på utsiden av pipetten med tupfer.
  2. Skyll tippen godt ved å resuspendere opp/ned 4-5 ganger (ikke bland mot kork). Unngå skum og luftbobler.
  3. La glasset stå i 10 minutter for fullstendig hemolysering.
  4. Bland i cirka 2 minutter på rulle.
  5. Overfør litt av blandingen til Bürker tellekammer ved hjelp av et kapillærrør rett etter blanding. Unngå etterfylling. Tilsett prøve på begge sidene av kammeret.
  6. Legg tellekammeret i fuktekammer i 15 min.
  7. Tell 16 CD-ruter i tellekammer i fasekontrastmikroskop. Ved verdier <50 bør man telle flere ruter enn angitt.
  8. Vask tellekammeret og dekkglasset godt etter bruk med zalovann, skyll i destillert vann og tørk med lofritt materiale.
  9. Utregning ved telling av 16 CD ruter: Telletallet = antall trombocytter x 109/L

 

Videoene er utarbeidet ved Høyskolen i Bergen.

 

UNDERSØKELSE AV TROMBOCYTTAGGREGATER I FULLBLOD OG PLASMA

Prøvemateriale EDTA-blod eller Na-citrat-blod
Prøvemengde Cirka 10 uL
Prøvebehandling Unngå langvarig stase ved prøvetaking. Prøven bør stå i ro i 15 minutter etter prøvetaking.
Holdbarhet     72 timer i romtemperatur
Utstyr/reagenser Automatpipette med tipper, Kapillærrør, Objektglass, Dekkglass, Lysmikroskop/Fasekontrastmikroskop

 

I denne øvelsen skal det anvendes flere metoder for undersøkelse av trombocyttaggregater. Normalt vil man først undersøke i fullblod. Dersom man ikke ser aggregater i fullblod vil man videre undersøke platerikt plasma. Blodutstryk kan benyttes dersom man fremdeles er usikker. 

I FULLBLOD:

  1. Bland EDTA- glasset (evt. citrat-glasset) godt.
  2. Legg en liten dråpe blod (ca 5 uL holder) på objektglasset, legg dekkglass over.
  3. Benytt fasekontrastmikroskop (evt vanlig mikroskop) innstilt på 40x til å undersøke om det er trombocyttaggregater tilstede. Trombocyttene skal ligge hver for seg mellom erytrocyttene, hvis trombocyttene henger sammen, minimum 3 stk flere steder i preparatet, er det trombocyttaggregater i prøven.

 

I PLATERIKT PLASMA:

  1. Bland EDTA- glasset (evt. citrat-glasset) godt.
  2. Løsne korken fra glasset og sett prøven i et stativ i cirka 20 minutter (slik at cellene synker).
  3. Pipetter en liten dråpe platerikt plasma (ca 5 uL holder) fra sjiktet helt ned mot blodlegemene på et objektglass og legg et dekkglass over.
  4. Benytt vanlig mikroskop (evt. fasekontrastmikroskop) innstilt på 40x til å undersøke om det er trombocyttaggregater tilstede i plasma. Kriteriene for vurdering er samme som i fullblod.

 

SENKNINGSREAKSJON (SR)

Prøvemateriale Spesialrør, Na-citrat med sort kork
Prøvemengde Ett rør
Prøvebehandling Prøven blandes grundig ved å vende opp/ned 10 ganger umiddelbart etter prøvetaking.
Holdbarhet     2 timer etter prøvetaking
Utstyr/reagenser Spesialstativ for oppsett og avlesning

 

  1. Prøven blandes ved å vende opp/ned 10 ganger rett før oppsett.
  2. Plasser røret i stativet
  3. Avleses etter nøyaktig en time ved å bruke gradert millimeterskala på stativet. På grunn av overflatespenninger stiger væsken litt mot glassøylens vegg slik at det dannes en fordypning i midten av søylen (menisk). SR-verdien leses av i bunnen av menisken.