Home › Koagulasjon › Utførelse

Utførelse

Første dag:

  • utføre PT-INR-analyse automatisk på kvalitetkontroller og utleverte prøver (enten på STart4 eller STart Max).
  • utføre manuell PT-INR-analyse på kvalitetskontroller og utleverte prøver.

Andre dag:

  • kalibrere fibrinogenanalysen på STArt Max.
  • utføre  fibrinogen-analyse på kvalitetskontroller og utleverte prøver (på STart Max).
  • utføre APTT-analyse på kvalitetskontroller og utleverte prøver (på STart 4). 

 

PRØVETAKING

Til koagulasjonsanalyser bruker vi Na-citrat (0,109 mol/L) som er en antikoagulant i væskeform. Husk å fylle rørene helt opp for å unngå fortynningsfeil. Bruk minst mulig stase.

Rørene sentrifugeres så snart som mulig etter prøvetakingen og innen 1 time. Rørene sentrifugeres i 10 minutter på ca. 2000G (3200 rpm i Eppendorf sentrifugen).

Plasma pipetteres over i plastrør fordi glass virker aktiverende på koagulasjonssystemet og kan gi feil resultater.

 

 

KVALITETSKONTROLLER

STA Routine QC N og STA Routine QC P benyttes til alle analysene.

Flaskene må romtempereres før rekonstituering i nytappet destillert vann (mengde er angitt på flasken). Merk flaskene med dato og tid for rekonstituering.

 PT-INR

Prøvemateriale Citratplasma
Prøvebehandling Unngå langvarig stase ved prøvetaking. Citrat-røret må fylles helt opp.          

 

 

 

 

 

 

Prøven sentrifugeres snarest (innen en time) etter prøvetaking ved 2000xg i 10 minutter. Plasma avpipetteres over i plastrør.
Prøveforberedelse Citratplasma fortynnes 1:7 med Owrens buffer (f.eks. 200uL plasma + 1200uL OWRENS). Denne fortynningen benyttes til både manuell og halvautomatisk metode.          

 

 

 

 

 

 

 
Holdbarhet     48 timer
Kvalitetskontroller STA Routine QC PSTA Routine QC N    

 

 

 

 

 

 

Målverdiene er lot-avhengig, se analyseskjema/Levey Jennings diagram.

 
Reagenser Start reagens: SPA + 1 (tørrstoff tromboplastin) og 2 ( diluent, løsning som inneholder Calsium)          

 

 

 

 

 

 

Owren Koller buffer til fortynning av prøver og kontroller

Destillert vann.

 

 

Fortynning av prøver og klargjøring av reagens

Citratplasma fortynnes 1:7 med Owrens buffer (f.eks. 200uL plasma + 1200uL OWRENS). Denne fortynningen benyttes til både manuell og halvautomatisk metode.

Reagenser og buffer skal ha romtemperatur. Løs opp reagenser som angitt på flasken. La de stå i ro i 30 minutter etter tilsetning, bland godt uten å ryste.

 

 

PT-INR MANUELL METODE

    1. Sett cirka 2,5 mL SPA+ reagens til oppvarming i varmeblokk/vannbad.
    2. Alle prøver/kontroller skal analyseres i duplikater.
    3. Merk to plastrør for hver prøve/kontroll.
    4. 100 uL fortynnet (1:7) citratplasma pipetteres i merkede plastrør og settes til forvarming i varmeblokk/vannbad (37ºC) i 3 minutter.
    5. Koagulasjonsprosessen startes ved at 200 µL oppvarmet reagens tilsettes. Innholdet blandes ved et skarp rykk.
    6. La reagensrøret stå i ro 10 sekunder før det løftes ut av varmeblokka/vannbadet for å se etter dannelse av koagel. Deretter løftes det forsiktig med jevne mellomrom (1-2 sekunder).
    7. Klokken stoppes så snart et koagel er dannet, tiden noteres.
    8. Beregne PT-INR ved hjelp av oppgitt normaltid og ISI verdi:
    9. PT-INR = (pasientens protrombintid (sek) / normaltid (sek))ISI 

                   (Alternativt kan verdien leses av i tabell)

 

 

PT-INR HALVAUTOMATISK METODE på STart4®

  1. Merk en ren 2,5 mL «stepper» med «SPA», og fest den til pipetten som er koblet til instrumentet. Sug opp SPA- reagens i «stepper» pipetten, tørk utsiden og «prime» ved å trykke en gang på dispenseren, sett deretter pipetten til oppvarming på instrumentet. Innstill stepper (automatpipetten) til riktig volum: 100 µl.
  2. På analysemaskinen, Velg 1: Test Mode og enter. Velg 6. Others, deretter 4. SPA og enter.
  3. Instrumentet kommer nå opp med første prøve sekvensnummer, og arbeidsmenyen for analysering av prøver vises. Gi prøver og kontroller prøvenummer, og legg tallene fortløpende inn i maskinen (de registreres som duplikater automatisk). Trykk enter en ekstra gang etter siste registrering.
  4. Plasser en stålkule i kyvettene som skal benyttes (to kyvetter per prøve/kontroll).
  5. Pipetter 50µl fortynnet prøve/kontroll i kyvettene og aktiver forvarmingen (klokke-symbolet).
  6. Når det begynner å pipe, flytt kyvettene til analyseenheten.
  7. Dersom det er en stund siden pipetten har vært brukt, hold den over en beholder og «Prime» ved å trykke på dispenseren på pipetten en gang
  8. Aktiver pipetten ved å trykke på knappen med pipettesymbol (sjekk at kulene beveger seg), og pipetter startreagens mykt og kontrollert (uten å sprute)i hver av kyvettene som du har prøve i.
  9. Instrumentet leser av klot- tiden og gir ut svar i INR. Resultatet skrives ut automatisk. (Benytt resultatet som vises nederst til høyre på svarrapporten). 

Videoen viser utførelse på PT-INR på STart4® (men vær obs på at volumene for reagens og prøve er feil):

PT-INR HALVAUTOMATISK METODE på STart Max®

  1. Merk en ren «stepper» med «SPA», og fest den til pipetten som er koblet til instrumentet. Sug opp SPA- reagens i «stepper» pipetten, tørk av utsiden og sett til oppvarming på instrumentet. Innstill automatpipetten til å avgi riktig volum: 100 µL.
  2. Trykk på symbolet som viser en kyvette med kule og klokke for å starte med analysering, og velg inkubasjonsområde (A, B, C eller D).
  3. Trykk Parameter, og velg Owren_PT.
  4. Velg Patients (også på kontrollene) og legg inn PrøveID/kontroll-ID på de to prøvene/kontrollene som skal analyseres i kyvetteraden (de registreres som duplikater automatisk). Du kan legge inn Parameter og PrøveID for flere rader fortløpende. 
  5. Plasser en stålkule i kyvettene som skal benyttes (to kyvetter per prøve/kontroll).
  6. Pipetter 50µl fortynnet prøve/kontroll i de korrekte kyvettene (trykk på den aktuelle raden (A, B,C eller D) for å se prøve-ID). Når en rad er ferdig pipettert, aktiverer du tidtaker for forvarming ved å trykke på timeglass-symbolet.
  7. Når det begynner å pipe, trykk på pipette-symbolet (nederst), og flytt kyvetteraden til analyseenheten.
  8. Hold pipetten over en beholder og «Prime» ved å trykke på dispenseren på pipetten en gang.
  9. Pipetter startreagens mykt og kontrollert (uten å sprute)i hver av kyvettene som du har prøve i (instrumentet viser fortløpende hvilken kyvette som skal ha reagens (1, 2, 3, 4).
  10. Instrumentet leser av klot- tiden. Trykk på den grønne pilen for å overføre resultatene. For å se PT-INR resultatene, går du til hovedmeny og velger Patients. Markér aktuell prøve og trykk på filmappesymbolet. Noter resultatet eller ta bilde. Resultatet som skal benyttes står til venstre (Aux 1).

APTT (på STart4®)

Prøvemateriale Citratplasma
Prøvebehandling Unngå langvarig stase ved prøvetaking. Citrat-røret må fylles helt opp.          

 

 

 

 

 

 

Prøven sentrifugeres snarest (innen en time) etter prøvetaking ved 2000xg i 10 minutter. Plasma avpipetteres over i plastrør.

 
Holdbarhet     Analysering bør utføres innen 4 timer etter prøvetaking (innen 1 time dersom pasienten behandles med heparin).
Kvalitetskontroller Rekonstitueres som angitt på flasken.          

 

 

 

 

 

 

STA Routine QC P

STA Routine QC N

Målverdiene er lot-avhengige, se analyseskjema/Levey Jennings diagram. 

 
Reagenser PTT Automate reagens, rekonstitueres som angitt i pakningsvedlegg.          

 

 

 

 

 

 

CaCl2  0,025 M (ferdiglaget).

Destillert vann, nytappet.

 

 

  1. Merk en ren «stepper» (pipette koblet til koagulometeret), med «APTT». Sug opp forvarmet (37º) CaCl2 reagens (0,025 M)- reagens i «stepper» pipetten. Innstill stepper (automatpipetten) til riktig volum: 50 µl
  2. På analysemaskinen, Velg 1: Test Mode og enter. Velg 2. APTT.
  3. Instrumentet kommer nå opp med første prøve sekvensnummer, og arbeidsmenyen for analysering av prøver vises. Gi prøver og kontroller prøvenummer, og legg tallene fortløpende inn i maskinen.
  4. Plasser en stålkule i kyvettene som skal benyttes (to kyvetter per prøve/kontroll).
  5. Pipetter 50µl ufortynnet prøve/kontroll i kyvettene, deretter 50µl APTT-reagens i hver kyvette. Disse skal inkuberes sammen. Aktiver forvarmingen (klokke-symbolet).
  6. Når det begynner å pipe, flytt kyvettene til analyseenheten.
  7. Hold pipetten over en beholder og «Prime» ved å trykke på dispenseren på pipetten en gang
  8. Aktiver pipetten (press knappen med pipettesymbol) og pipetter CaCl2 -reagens mykt og kontrollert (uten å sprute) i hver av kyvettene som du har prøve i.
  9. Instrumentet leser av klot- tiden og gir ut svaret i sekunder.

 

 

Fibrinogen (på STart Max®)

Prøvemateriale Citratplasma
Prøvebehandling Unngå langvarig stase ved prøvetaking. Citrat-røret må fylles helt opp.          

 

 

 

 

 

 

Prøven sentrifugeres snarest (innen en time) etter prøvetaking ved 2000xg i 10 minutter. Plasma avpipetteres over i plastrør.
Prøveforberedelse Citratplasma fortynnes 1:20 med Owrens buffer (50uL plasma + 950uL OWRENS).
Holdbarhet     Citrat-blod sentrifugeres og plasma avpipetteres til plastrør. Prøven må analyseres innen 24 timer.
Kvalitetskontroller STA Routine QC P 

 

 

 

 

 

 

STA Routine QC N  

 

Målverdiene er lot-avhengige, se analyseskjema/Levey Jennings diagram 

 
Reagens Liquid fib (ferdig løst)         

 

 

 

 

 

 

Owren Koller-buffer til fortynning av prøver og kontroller

 

 

Fortynning av prøve/kontroller og klargjøring av reagens:

Citratplasma fortynnes 1:20 med Owrens buffer (50uL plasma + 950uL OWRENS).

Liquid Fib reagens: Reagenset er ferdig løst. Romtemperer reagensflasken.

 

Klargjøring av instrument:

Merk en ren «stepper» med «FIB», og fest den til pipetten som er koblet til instrumentet. Sug opp LIQUID FIB – reagens i «stepper» pipetten, tørk av utsiden og sett til oppvarming på instrumentet. Innstill automatpipetten til å avgi riktig volum: 50 µL. 

 

Kalibrering av Fibrinogen-analysen

Vanligvis (i arbeidslivet) blir analysen kalibrert når lotnummer på reagenset endres, eller når kontrollen ikke går inn. Vi skal kalibrere for å få en forståelse av prosessen.

Kalibrator: Unicalibrator, rekonstituert som angitt på flasken. 

Dere vil få utdelt ferdig fortynnet kalibrator (lotnr. 263622): 

Fortynning

1:9

1:12

1:20

1:40

Fibrinogen (g/L)

6,67 g/L

 5.0 g/L

3,0 g/L*

1,5 g/L

                                                                                 *Conc. at sample dilution 

  1. Fra hovedmeny; Velg Calibration, deretter FIB – STA Liquid Fib g/L
  2. Trykk GO
  3. Legg inn lot.nummer og expiration date på reagenset. Trykk Save.
  4. Legg inn lot.nummer og expiration date på kalibratoren. Trykk Save.
  5. Legg inn kalibratorverdien for konsentrasjonen på fibrinogen (Conc. at sample dilution, står i pakningsvedlegget). Trykk Save.
  6. Trykk på symbolet som viser en kyvette med kule og klokke for å starte med analysering av kalibratorfortynningene. Pipetteringsoppsettet finner du ved å trykke på henholdsvis kyvetterad A og B.
  7. Plasser en stålkule i kyvettene som skal benyttes (to kyvetter per prøve/kontroll).
  8. Pipetter 100µl fortynnet kalibrator i de korrekte kyvettene (trykk på den aktuelle raden (A, B). Når en rad er ferdig pipettert, aktiverer du tidtaker for forvarming ved å trykke på timeglass-symbolet.
  9. Når det begynner å pipe, trykk på pipette-symbolet (nederst), og flytt kyvetteraden til analyseenheten.
  10. Hold pipetten over en beholder og «Prime» ved å trykke på dispenseren på pipetten en gang.
  11. Pipetter startreagens mykt og kontrollert (uten å sprute)i hver av kyvettene som du har prøve i (instrumentet viser fortløpende hvilken kyvette som skal ha reagens (1, 2, 3, 4).
  12. Når analyseringen er ferdig, gå til hovedmeny, Calibration. Dersom kalibreringen er godkjent, er den markert med grønt. Trykk på symbolet som viser en graf for å se verdiene og standardkurven (ta bilde til rapport).
  13. Før du analyserer pasientprøver må du analysere kvalitetskontroller

 

Utførelse av analysen på kontroller og prøver:

  1. Trykk på symbolet som viser en kyvette med kule og klokke for å starte med analysering, og velg inkubasjonsområde (A, B, C eller D).
  2. Trykk Parameter, og velg Fibrinogen.
  3. Velg Patients (også på kontrollene) og legg inn PrøveID/kontroll-ID på de to prøvene/kontrollene som skal analyseres i kyvetteraden (de registreres som duplikater automatisk). Du kan legge inn Parameter og PrøveID for flere rader fortløpende. 
  4. Plasser en stålkule i kyvettene som skal benyttes (to kyvetter per prøve/kontroll).
  5. Pipetter 100µl fortynnet prøve/kontroll i de korrekte kyvettene (trykk på den aktuelle raden (A, B,C eller D) for å se prøve-ID). Når en rad er ferdig pipettert, aktiverer du tidtaker for forvarming ved å trykke på timeglass-symbolet.
  6. Når det begynner å pipe, trykk på pipette-symbolet (nederst), og flytt kyvetteraden til analyseenheten.
  7. Hold pipetten over en beholder og «Prime» ved å trykke på dispenseren på pipetten en gang.
  8. Pipetter startreagens mykt og kontrollert (uten å sprute)i hver av kyvettene som du har prøve i (instrumentet viser fortløpende hvilken kyvette som skal ha reagens (1, 2, 3, 4).
  9. Instrumentet leser av klot- tiden. Trykk på den grønne pilen for å overføre resultatene. For å se resultatene, går du til hovedmeny og velger Patients. Markér aktuell prøve og trykk på filmappesymbolet. Noter resultatet eller ta bilde. Resultatet utgis i g/L.

Kalibratorfortynning (dere får utlevert ferdige fortynninger)

Fortynning  1:9 1:12 1:20 1:40
OWRENS buffer 800 uL 1100 uL 950 uL 500 uL
TILSETT 100 uL Unicalibrator 100 uL Unicalibrator 50 uL Unicalibrator 500 uL av 1:20 fortynning

Konsentrasjon 

Fibrinogen (g/L)

     2,9