EVF – HEMATOKRIT (HCT)
Prøvemateriale | EDTA-blod |
Prøvemengde | Cirka 60 uL |
Prøvebehandling | Unngå langvarig stase ved prøvetaking. |
Holdbarhet | Analysen bør utføres innen 24 timer etter prøvetaking |
Utstyr | Hematokrit-rør (heparinisert), kitt, hematokrit-sentrifuge, avlesningstabell eller linjal. |
- Merk et hematokrit-rør med initialer (tusj), og fyll det med EDTA-blod til det er igjen cirka 0,5 cm uten blod i den ene enden. Hold pekefingeren på enden av røret, tørk av røret utvendig med tupfer.
- Tett den enden som er uten blod med kitt. Hold hematokrit-røret horisontalt slik at blodet ikke renner ut.
- Plasser røret i hematokrit-sentrifugen med kittpluggen ytterst (utfra senter) og skru fast dekselet på rotoren (pass på å plassere rør diagonalt ovenfor hverandre for å balansere).
- Sentrifuger ved 10 000 rpm i 3 minutter hvis du bruker sentrifugen Biofuge haemo. Sentrifuger ved 12000xg (11200 rpm) i 3 minutter hvis du bruker Pico17 Thermo Scientific sentrifugen.
- Avlesning foregår enten ved hjelp av hematokrit-diagram eller linjal. Med linjal måles lengdene a og b, regn ut a/(a+b).
Videoen er utarbeidet ved Høyskolen i Bergen.
MANUELL TELLING AV Trombocytter (TPK)
Prøvemateriale | EDTA-blod eller Na-citrat-blod |
Prøvemengde | 25uL |
Prøvebehandling | Unngå langvarig stase ved prøvetaking. Prøven bør stå i ro i 15 minutter etter prøvetaking. |
Holdbarhet | 72 timer i romtemperatur |
Utstyr/reagenser | Automatpipette og tipper, tupfer, 1% ammoniumoksalat-løsning, Bϋrkers tellekammer med dekkglass, kapillærrør, fuktekammer og mikroskop med fasekontrast. |
- 25 μl EDTA- blod overføres med automatpipette til rør med 475 μl ammoniumoksalat. Tørk av blod på utsiden av pipetten med tupfer.
- Skyll tippen godt ved å resuspendere opp/ned 4-5 ganger (ikke bland mot kork). Unngå skum og luftbobler.
- La glasset stå i 10 minutter for fullstendig hemolysering.
- Bland i cirka 2 minutter på rulle.
- Overfør litt av blandingen til Bürker tellekammer ved hjelp av et kapillærrør rett etter blanding. Unngå etterfylling. Tilsett prøve på begge sidene av kammeret.
- Legg tellekammeret i fuktekammer i 15 min.
- Tell 16 CD-ruter i tellekammer i fasekontrastmikroskop. Ved verdier <50 bør man telle flere ruter enn angitt.
- Vask tellekammeret og dekkglasset godt etter bruk med zalovann, skyll i destillert vann og tørk med lofritt materiale.
- Utregning ved telling av 16 CD ruter: Telletallet = antall trombocytter x 109/L
Videoene er utarbeidet ved Høyskolen i Bergen.
UNDERSØKELSE AV TROMBOCYTTAGGREGATER I FULLBLOD OG PLASMA
Prøvemateriale | EDTA-blod eller Na-citrat-blod |
Prøvemengde | Cirka 10 uL |
Prøvebehandling | Unngå langvarig stase ved prøvetaking. Prøven bør stå i ro i 15 minutter etter prøvetaking. |
Holdbarhet | 72 timer i romtemperatur |
Utstyr/reagenser | Automatpipette med tipper, Kapillærrør, Objektglass, Dekkglass, Lysmikroskop/Fasekontrastmikroskop |
I denne øvelsen skal det anvendes flere metoder for undersøkelse av trombocyttaggregater. Normalt vil man først undersøke i fullblod. Dersom man ikke ser aggregater i fullblod vil man videre undersøke platerikt plasma. Blodutstryk kan benyttes dersom man fremdeles er usikker.
I FULLBLOD:
- Bland EDTA- glasset (evt. citrat-glasset) godt.
- Legg en liten dråpe blod (ca 5 uL holder) på objektglasset, legg dekkglass over.
- Benytt fasekontrastmikroskop (evt vanlig mikroskop) innstilt på 40x til å undersøke om det er trombocyttaggregater tilstede. Trombocyttene skal ligge hver for seg mellom erytrocyttene, hvis trombocyttene henger sammen, minimum 3 stk flere steder i preparatet, er det trombocyttaggregater i prøven.
I PLATERIKT PLASMA:
- Bland EDTA- glasset (evt. citrat-glasset) godt.
- Løsne korken fra glasset og sett prøven i et stativ i cirka 20 minutter (slik at cellene synker).
- Pipetter en liten dråpe platerikt plasma (ca 5 uL holder) fra sjiktet helt ned mot blodlegemene på et objektglass og legg et dekkglass over.
- Benytt vanlig mikroskop (evt. fasekontrastmikroskop) innstilt på 40x til å undersøke om det er trombocyttaggregater tilstede i plasma. Kriteriene for vurdering er samme som i fullblod.
SENKNINGSREAKSJON (SR)
Prøvemateriale | Spesialrør, Na-citrat med sort kork |
Prøvemengde | Ett rør |
Prøvebehandling | Prøven blandes grundig ved å vende opp/ned 10 ganger umiddelbart etter prøvetaking. |
Holdbarhet | 2 timer etter prøvetaking |
Utstyr/reagenser | Spesialstativ for oppsett og avlesning |
- Prøven blandes ved å vende opp/ned 10 ganger rett før oppsett.
- Plasser røret i stativet
- Avleses etter nøyaktig en time ved å bruke gradert millimeterskala på stativet. På grunn av overflatespenninger stiger væsken litt mot glassøylens vegg slik at det dannes en fordypning i midten av søylen (menisk). SR-verdien leses av i bunnen av menisken.